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[size=2]本人3’端已经测出来了,现在做5‘端,却怎么也扩不出来。5'RACE做了两轮pcr,用的都是以下程序:即1、94度2分钟。2、94度30秒,72度3分钟,5cycle。3、94度 30秒,70度30秒,72度3min,5
2015年08月05日发布人:月牙牙
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,1min可以不?我的5'end预计不会超过1K。
2、是否怀疑模板的问题?用的oligodG接头。有听说做单引物不用接头效果也很好,下次想试试。
3、稀释度或者稀释操作出问题?
4、还是不用touchdown,做一做Tm梯度跑跑引物来做
2014年09月24日发布人:04906
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1000x Dex (1mM): MW=392.46, 1mM=0.39mg/ml in EtOH
1、3T3-L1前脂肪细胞诱导分化成脂肪细胞
3T3-L1小鼠成纤维细胞置于含10%FBS的高糖DMEM培养基中,37℃、5%CO2
2015年11月14日发布人:fklo83
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[size=2][color=Black][b]
养了有半年的3T3-L1,最近做诱导分化实验,可总是失败,到分化后第4天,细胞不少死亡,而且周围有大量黑点,还有脱壁情况发生.
这使我对细胞本身产生了怀疑,因为这细胞是别人送给我的
2012年02月18日发布人:loli
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[/color][/size],[size=4]我刚做过5’、3‘ RACE,我个人的经验如下:
1、首先,提的RNA必须完整,最好跑个RNA电泳来验证一下;
2、设计引物时要注意:Tm最好大于70度,两引物间要有100-200bp的重叠区
2011年09月27日发布人:幽兰君
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但今年开学一连复苏了3管细胞,均是分化前一切OK,分化第一天细胞状态也都正常,但到第2天,细胞就开始出现飘的多,飘细胞内出现浓缩颗粒,类似凋亡细胞,接下来就慢慢的飘的更多了,基本不分。
给看一张第一天的细胞,形态都很正常。细胞变圆,两头
2015年10月15日发布人:雪花子
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我做萘的硝化,文献报道都只有两个产物,而我做出来的有很明显的三个。拿1,8-纯品测液相,以前只有一个峰,最近测的却有明显的两个,1,8-二硝基萘会变质吗?变成了什么?申明柱子没有堵。,纯品做个核磁不,确定对的?
文献两个,你做出来三个
2014年06月19日发布人:iop
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[size=2][color=Black][font=黑体]
买了一家公司的二抗,说明书上也没有说明不可以用牛奶稀释。我就用常规的方法5%牛奶稀释。可是怎么都出不来结果。起先还以为是ECL有问题。后来直接点了二抗压片,发现只要加了牛奶就
2014年04月10日发布人:ha111
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各位大侠,对于间二硝基苯的提纯,有人设计了:让对二硝基苯,邻二硝基苯先烷氧基化,而间二硝基苯的不参加反应再提纯,说这种方法间二硝基苯的纯度可以达到99以上,不知道哪位高手给点意见。还有就是烷氧基化怎么做?谢谢!,硝基芳烃异构体大部分可以用
2014年05月19日发布人:jiankufanhan
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用PEG400作溶剂,溴代正葵烷与叠氮化钠在常温下反应,按文献上做的,结果点板看不到产物点,求大虫指点,PEG400是啥。没用过,一般都用DMF做溶剂,80°左右反应,你那个底物的话,估计底物和产物是一个点,都是极性很小的吧,一般叠氮产物
2014年03月15日发布人:iop